人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用 途： 用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的水平。向預(yù)先包被了人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)，溫育；洗滌后，加入HRP標(biāo)記過的脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成
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1 |
標(biāo)準(zhǔn)品（48μg/L） |
0.5ml |
7 |
顯色劑A液 |
6ml |
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2 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
3ml |
8 |
顯色劑B液 |
6ml |
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3 |
酶標(biāo)包被板 |
12孔×8條 |
9 |
終止液 |
6ml |
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4 |
酶標(biāo)試劑 |
6ml |
10 |
說明書 |
1份 |
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5 |
30倍濃縮洗滌液 |
20ml |
11 |
封板膜 |
2張 |
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6 |
樣品稀釋液 |
6ml |
12 |
密封袋 |
1個 |
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項(xiàng)
1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。
3． 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用PBS稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進(jìn)行測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
4． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
5． 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序
1． 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
24μg/L （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/L （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/L （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/L （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/L （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2． 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。
3． 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
4． 每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。
5． 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。
6． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
7． 取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8． 測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
9． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
檢測范圍：1μg/L→30μg/L
規(guī)格： 96T/盒
保存： 2-8℃
有效期： 6個月（2-8℃）。