切片制備：將組織塊平放于軟塑料蓋或特制小盒內(nèi)（直徑2cm），如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒(méi)組織，然后將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內(nèi)，當(dāng)盒底部接觸液氮時(shí)即開(kāi)始?xì)饣序v，此時(shí)小盒保持原位切勿浸入液氮內(nèi)，大約10-20秒組織即迅速冰凍成塊。取出組織冰塊立即置入-80℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆茫蛑糜诤憷淝衅瑱C(jī)冰凍切片。冰凍切片4~8mm，冰凍切片后如不染色，必須吹干，儲(chǔ)存低溫冰箱內(nèi)，或進(jìn)行短暫預(yù)固定后儲(chǔ)存冰箱內(nèi)保存。
1. 冰凍切片室溫放置30分鐘后，入4℃丙酮固定10分鐘，也可根據(jù)需要選擇其他方式。PBS洗，5min，3次；
2. 3% H2O2去離子水37℃孵育10min，PBS洗，5min，2次；
3. 5～10％正常山羊血清封閉，37℃孵育10-20min，傾去血清，勿洗；
4. 適當(dāng)比例的一抗工作液孵育，4℃過(guò)夜或37℃ 1～2h；
5. 復(fù)溫20min，PBS洗3min，三次；
6. 二抗孵育：加生物素化標(biāo)記二抗，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
7. 三抗孵育：加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
8. 加DAB顯色劑顯色（或AEC顯色），鏡下觀察結(jié)果，適時(shí)終止；
9. 蘇木素復(fù)染5min，自來(lái)水沖洗片刻，75%的鹽酸酒精溶液分化30s，自來(lái)水沖洗5min藍(lán)化；
10. 脫水。依次經(jīng)過(guò)70%、80%、90%、95%、無(wú)水乙醇，各2min，二甲苯15min，三次；
11. 封片，中性樹(shù)膠封片。
光學(xué)顯微鏡100×或400×觀察，拍片。
圖象評(píng)分。